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第一部分 器官来源的干细胞第1章 神经干细胞的分离和特征描述3

1．引言3

2．试剂和仪器5

3．方法8

参考文献17

第2章 神经干细胞及其操作18

1．引言19

2．成体干细胞的体内小生境20

3．神经干细胞的体外操作21

4．结论和预测30

5．神经干细胞培养规程和生物学特性31

6．啮齿类鼠科动物神经干细胞培养32

7．人神经干细胞培养34

8．ICC标志定义干细胞和分化产物35

参考文献36

第3章 视网膜干细胞42

1．引言43

2．材料和方法48

3．总结54

参考文献54

第4章 牙髓干细胞58

1．引言58

2．牙髓干细胞的鉴定60

3．牙髓干细胞的分离61

4．牙髓干细胞的分化62

参考文献65

第5章 小鼠精原干细胞的培养和移植69

1．引言70

2．精原干细胞（SSC）70

3．SSC移植72

4．SSC培养77

5．用siRNA转染培养的小鼠SSC83

6．结果85

参考文献86

第6章 成体肺中的干细胞90

1．引言91

2．成体肺的解剖学和细胞多样性92

3．成体肺的干细胞表型和小生境93

4．体内肺损伤模型97

5．用气管上皮移植片回植模型研究干细胞在近端气道内的增殖101

6．利用体外克隆形成率对导气部上皮的干祖细胞进行特征描述108

7．气道SMG干祖细胞的研究模型111

参考文献113

第7章 胰腺细胞及其祖细胞118

1．引言119

2．胰腺发育119

3．出生后的β细胞起源121

4．已经存在的β细胞121

5．导管122

6．腺泡123

7．骨髓细胞123

8．成体干细胞124

9．β细胞分化124

10．总结和展望124

11．方法学：小鼠谱系追踪实验的设计125

参考文献127

第8章 来自生殖细胞的亚全能干细胞：衍化生成和维持培养130

1．引言131

2．生殖细胞的发育132

3．EGC的衍化生成133

4．EG培养物的特征描述139

5．EB形成和分析144

6．EB源细胞形成144

参考文献147

第9章 来自羊水和胎盘的亚全能干细胞151

1．引言152

2．发育生物学中的羊水和胎盘152

3．一种新思路：将羊水和胎盘细胞用于治疗153

4．祖细胞的分离和特征描述153

5．羊水和胎盘源祖细胞的分化154

6．结论157

参考文献158

第10章 脐带血中的造血干细胞和祖细胞160

1．引言：脐带血移植161

2．人类脐带血中造血祖细胞和干细胞以及EPC的评估方法167

3．上述方法的应用179

参考文献181

第11章 骨髓造血干细胞：纯化与功能分析188

1．引言188

2．其他的HSC表面标志物：Tie-2、Endoglin和SLAM家族受体189

3．HSC与SPKLS的荧光染料外向通量190

4．不同纯化方法所得HSC的特性192

5．通过Hoechst 33342染色分选HSC的方法（SP群）192

参考文献196

第12章 干细胞及其分化的微阵列分析198

1．引言199

2．微阵列技术简介199

3．实验设计201

4．结果验证215

5．干细胞及其分化微阵列的应用实例215

6．鉴定“干性”215

7．分化216

8．干细胞小生境216

9．未来研究的方向218

参考文献218

第13章 利用成体干细胞的组织工程学223

1．引言223

2．生物材料225

3．血管生成因子227

4．用于组织工程的成体干细胞228

5．结论232

参考文献232

第14章 利用间充质干细胞的组织工程学236

1．MSC的定义和治疗潜力237

2．MSC的分离和扩增238

3．MSC的多谱系分化241

4．基于MSC的临床移植疗法247

5．结论249

参考文献250

第二部分 胚胎干细胞及其衍生物第15章 小鼠胚胎干细胞257

1．历史回顾258

2．影响小鼠ES细胞建系效率的因素259

3．影响小鼠ES细胞参与形成嵌合胚胎的因素260

4．小鼠ES细胞建系期间的关键事件261

5．ES细胞系的冻存264

6．特征描述264

7．操作规程265

参考文献270

第16章 人类胚胎培养物272

1．引言273

2．人类胚胎发育273

3．胚胎活组织检查275

4．人类胚胎培养物277

5．结果281

参考文献283

第17章 人类胚胎干细胞：衍化生成和维持培养286

1．引言287

2．hES细胞系的衍化生成287

3．hES细胞的维持培养291

4．结论294

参考文献295

第18章 人类胚胎干细胞：特征描述和评估298

1．引言298

2．未分化hESC的特征描述299

3．结论312

参考文献313

第19章 人类胚胎干细胞：无饲养层培养318

1．引言318

2．hESC无饲养层培养法322

参考文献325

第20章 来自胚胎干细胞的神经干细胞、神经元和神经胶质细胞328

1．引言329

2．操作方法329

3．小结341

4．培养基和添加剂341

参考文献343

第21章 从胚胎干细胞到造血细胞的分化345

1．引言346

2．方法354

参考文献368

第22章 从胚胎干细胞到心肌心肌细胞的分化374

1．引言374

2．拟胚体形成375

3．心肌细胞分化383

4．心肌细胞富集384

5．结论385

参考文献386

第23章 从小鼠胚胎干细胞到胰岛素-生成细胞的分化388

1．引言389

2．材料和方法394

3．结果401

4．小结403

参考文献404

第24章 胚胎干细胞中的转基因表达和RNA干扰408

1．逆转录病毒表达载体和ESC408

2．RNA干扰和ESC410

3．siRNA表达载体设计410

4．逆转录病毒生产411

5．逆转录病毒和慢病毒基因转移到小鼠和人ESC中412

6．小鼠和人ESC中的转基因表达和siRNA表达413

7．生物技术应用与医学应用417

参考文献418

第25章 人类胚胎干细胞中慢病毒载体介导的基因递送421

1．引言422

2．设计基于HIV-1的载体用于转导hESC425

3．重组病毒颗粒的产生429

4．hESC的转导431

5．转导效率的测量433

6．表达高水平转基因的转导hESC的富集433

7．病毒滴度的确定435

参考文献436

第26章 用重组酶系统改造胚胎干细胞439

1．引言440

2．位点特异性重组440

3．设计用于位点特异性重组的底物444

4．产生条件性基因突变448

5．重组酶介导的盒式交换453

6．分子开关454

7．实验方法456

参考文献464

第27章 利用胚胎干细胞的组织工程学470

1．引言471

2．以hESC作为用于组织工程的细胞来源时的特别考虑472

3．特定无动物条件下培养hESC472

4．获得所需的细胞群体472

5．选择合适的支架473

6．放大一个可调控的生物过程473

7．hESC来源的结缔组织前体在组织工程的应用474

8．hESC在MEF饲养层上的维持培养474

9．收集样品分析479

参考文献482