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目录1

第一部分 基本方法1

1．PCR基因扩增的原理1

2．PCR基因扩增的反应成分和作用7

3．染色体基因组扩增15

4．PCR扩增模板的制备（体液）25

5．用石蜡包埋组织制备样本31

6．远古DNA的扩增34

7．RNA的多聚酶链反应41

8．cDNA末端快速扩增（RACE）47

9．PCR引物设计原则57

10．DNA扩增的简并引物62

11．耐热DNA多聚酶69

12．DNA多聚酶在PCR中的应用条件75

13．用简并引物进行cDNA克隆85

14．用dGTP类似物进行PCR扩增92

15．竞争性PCR做mRNA定量97

16．定量PCR（内参标法）106

17．不对称PCR产生单链DNA112

18．用PCR克隆基因片段117

19．双标记寡核苷酸结合实验123

20．彩色PCR技术129

21．探针和引物的非同位素标记133

22．生物素标记dUTP掺入143

第二部分 PCR在分子生物学研究中的应用147

23．点杂交法检测PCR产物147

24．PCR扩增显微切割染色体所得DNA153

25．PCR模板体外转译实验156

26．重组PCR162

27．锚定多聚酶链反应168

28．DNaseI足迹法171

29．用TaqDNA多聚酶测序175

30．用噬菌体启动子直接测序180

31．变性梯度凝胶电泳鉴定DGGEDNA多态性186

32．反向PCR（染色体步移）194

33．同源性重组的检测200

34．RNA转录扩增和小珠夹心杂交检测法205

35．应用单个精子或双倍体细胞进行单倍型分析212

36．扩增核蛋白体RNA基因进行分子进化研究218

37．PCR研究真菌种系发育224

第三部分 PCR分析遗传类型和疾病231

38．甲型血友病的基因诊断和产前诊断231

39．苯丙酮尿症的诊断236

40．巴氏水肿胎儿的产前基因诊断239

41．β-地中海贫血的基因诊断242

42．HLA基因的多态性分析252

43．应用多重PCR诊断中国人DMD基因缺失301

44．检测线粒体DNA突变引起的Leber s遗传性视神经病306

45．胎儿性别鉴定310

46．性联锁鱼鳞病基因突变的检测315

47．以可变的简单序列丛诊断强直性肌营养不良318

第四部分 肿瘤323

48．PCR扩增免疫球蛋白重链基因CDR-序列检测B-淋巴系统白血病和淋巴瘤323

49．应用PCR技术扩增T细胞受体基因重排332

50．PCR检测慢性粒细胞白血病abl/bcr嵌合基因的mRNA序列339

51．分析ras基因点突变345

52．B细胞淋巴瘤t（14;18）染色体重排360

53．PCR技术诊断视网膜母胞细胞瘤365

第五部分 法医学371

54．微量法医检材DNA制备371

55．应用PCR和序列分析技术确定血缘关系376

56．扩增片段长度多态性分析在法医学中的应用385

第六部分 病毒和支原体393

57．检测人类T-细胞淋巴瘤／白血病病毒393

58．人类免疫缺陷病毒的检测400

59．乙型肝炎病毒RNA的测检406

60（A）．检测丙型肝炎病毒414

60（B）．RNAPCR检测丙型肝炎病毒RNA及其临床应用418

61（A）．生殖系统的人类乳头瘤病毒的检测和分型426

61（B）．PCR检测第16、18型人类乳头瘤病毒435

62．检测人巨细胞病毒感染439

63．检测肠道病毒445

64．检测新病毒450

65．应用PCR技术扩增和定型粪便标本中的轮状病毒458

66．人类细小DNA病毒B19的检测465

67．检测腺病毒470

68．肺炎支原体检测475

第七部分 细菌和真菌479

69．从真菌菌丝或单个孢子中分离DNA479

70．PCR和基因探针方法检测环境水样的致病菌484

71．检测莫氏立克次体491

72．检测博氏疏螺旋体495

73．检测痢疾性腹泻病源菌502

74．快速检测产VT毒素大肠杆菌511

75．肠毒素型（LT）大肠杆菌的检测516

76．PCR检测结核和其他分支枝菌病方面的应用521

77．应用PCR法于大麦黄矮病毒（BYDV）核苷酸序列分析和病毒外壳蛋白基因全长cDNA的合成533

第八部分 农业533

78．PCR分析水稻核糖体基因的第一转录间隔区539

79．PCR检测携带大麦黄矮病毒（BVDV）的单头蚜虫介体543

第九部分 装备和应用547

80．PCR实验室组建547

81．PCR基因扩增仪550

82．计算机辅助PCR引物设计562

83．PCR引物的合成568

84．PCR引物的分离和纯化574

85．设备和PCR常用试验技术580

86．常用试剂配制593

附录：名词解释608